Forholdsregler for polyakrylamidgelelektroforese

· PolyakrylamidGel må ved akrylamidmonomer, startmateriale, katalysator og salt- og bufferblandingen sammen.

· akrylamidog bis (n, n '- metylen dobbelt akrylamid) er monomerform gelmatrise.

· Ammoniumpersulfat Start limpolymerisasjonsprosess. Formuleringen av limet krever 10% ammoniumpersulfatoppløsning fremstilt i vann. Det meste av informasjonen indikerte et behov for aktiv bruk. Imidlertid kan 10% -løsningen plasseres ved 4 ℃ i flere uker uten betydelig tap av aktivitet. Lag opp til 10 ml og kast når limet ikke klarer å samle.

Tips: prosentandelen avakrylamidI sekvenseringslim og proteinlim er ikke det samme. Hvis du bruker premade akrylamid: bis -løsning, må du sørge for å få riktig flaske.

· Teme (n, n, n ', n'- tetrametyletylendiamin) er en katalysator, i en brun flaske, plassert i kjøleskapet. Tilsett rett før du helles lim.

· Polyakrylamidelektroforese brukt glass i elektroforese bør vaskes før og etter hver gang. Etter elektroforese, vask med en myk børste og klut i varmt såpevann, skyll med destillert vann og stå for å tørke.

· Fukt og støv kan forårsake med hul polymer. Før elektroforese, rengjør glassplaten med glassrenser og tørk den med en myk børste. Vask med destillert vann og tørk grundig med en papirtørk. Skylling med 70% etanol før tørking med papir hjelper til med å rense og fremskynde tørking. Tilsett prøver av akrylamid suksessivt: bis, vann, bufferoppløsning, ammoniumpersulfat, temat. Rist godt og hell umiddelbart.

Det er ikke nødvendig å degass polyakrylamid før polymerisasjon. (Akrylamid pleide å være plassert i et vakuum for å fjerne bobler fordi oksygen hemmer polymerisasjon.)

Horisontale limpunktprøve tips.

· Sett et stykke svart papir i bunnboksen, svart bakgrunn for å lage noen prøvehull for å se tydeligere.
· Limtank fylt buffer, like over kolloidet.
· Hvis kanten har et lys, slå på lysene, la lys skinner kolloid. Tegn prøven inn i pipetten.
· Bruke automatisk pipetteringsenhet.
· I 10-200 MU kan væskeflyttingspunkt brukes i de fleste punktene på prøven. For veldig små prøvehull (mindre enn 10μ1) er det lange pipettehodet som brukes til sekvenseringslim mer praktisk.

· Pipettering bare nedsenket i prøven, og inhalerer sakte bevegende væske. Prøven kan virke klissete med glyserin, og rask pumping kan trekke luftbobler inn i pipettehodet.

· Prøver etter inhalering av pipettering, vil bevege væskehodet forsiktig på kanten av røret eller tørke papir suge væskehode utenfor dråpene. Vær forsiktig så du ikke suger prøven.

Plasser prøven i prøvehullet

· Pipetteringsanordning For å holde litt trykk, få prøvene til å bevege deg overløpsvæske.
· Pipetteringhodet som er satt inn i bufferen, litt høyere enn flekkhullene, opprettholder positivt trykk. Spissen av pipetten kan settes inn i et lite hull.
· Sakte og jevnlig utprøvene ut. Pipettspissen er plassert over punktprøvehullet, og prøven vil synke ned i hullet. La prøven synke for å fylle prøvehullet i stedet for å skyve inn.
· Når den siste dråpen av prøven med flytende hode, vil væsken bevege seg til andre etappe, løft sakte væskeflyttingen, bevege deg ut av bufferen

Hvordan gjør du vertikal limprøvetaking?

· Vertikale limpunktprøvehull dannet mellom to glassbiter. I veldig tynt lim kan ikke pipettehodet engang settes inn mellom to glassplater. Se glyserinet! Sett pipethodet over prøvehullet og prøven vil synke ned i hullet.
· Punktprøve før, sørg for å sette det vertikale punktet til polypropylen acyl gelprøvehull er skylt rent. Vask bort det upolymeriserte akrylamidet og vannet som kan vises i bunnen av prøvehullet. Vannet kan gjøre prøvehullet betydelig mindre. Bruk en 25 ml eller 50 ml sprøyte og en 18-gauge nål. Hell i elektroforesebufferen og skyller prøvehullet forsiktig.
· Det kan være vanskelig å se prøvehullet, men på samme måte er resten lett. Hvis det er overflødig hull, kan prøvebufferen testes med bromofenolblått.