Forholdsregler for polyakrylamidgelelektroforese

· polyakrylamidgel må av akrylamidmonomer, polymerisasjonsutgangsmateriale, katalysator, og høyre salt og bufferblanding sammen.

· akrylamidog BIS (N,N'-metylendobbelakrylamid) er monomerformen gelmatrise.

· ammoniumpersulfat starter limpolymerisasjonsprosessen. Formuleringen av limet krever 10% ammoniumpersulfatløsning fremstilt i vann. Mesteparten av informasjonen tydet på behov for aktiv bruk. Imidlertid kan 10 %-løsningen plasseres ved 4 ℃ i flere uker uten betydelig tap av aktivitet. Fyll opp til 10 ml og kast når limet ikke samler seg.

Tips: Prosentandelen avakrylamidi sekvensering lim og protein lim er ikke det samme. Hvis du bruker ferdiglaget akrylamid: BIS-løsning, sørg for å få riktig flaske.

· TEMED (N, N, N', N'-tetrametyletylendiamin) er en katalysator, i en brun flaske, plassert i kjøleskapet. Tilsett rett før du heller lim.

· polyakrylamidelektroforese brukt glass i elektroforese bør vaskes før og etter hver gang. Etter elektroforese, vask med en myk børste og klut i varmt såpevann, skyll med destillert vann og la det tørke.

· fuktighet og støv kan forårsake med hul polymer. Før elektroforese, rengjør glassplaten med glassrens og tørk av den med en myk børste. Vask med destillert vann og tørk grundig med en papirserviett. Å skylle med 70 % etanol før du tørker med papir bidrar til å rense og fremskynde tørkingen. Tilsett prøver av akrylamid etter hverandre: BIS, vann, bufferløsning, ammoniumpersulfat, TEMED. Rist godt og hell umiddelbart.

Det er ikke nødvendig å avgasse polyakrylamid før polymerisering. (Akrylamid pleide å bli plassert i et vakuum for å fjerne bobler fordi oksygen hemmer polymerisering.)

Horisontale limpunktprøvespisser.

· legg et stykke svart papir i den nederste boksen, svart bakgrunn for å lage et prøvehull for å se klarere.
· limtankfylt buffer, like over kolloidet.
· hvis kanten har et lys, slå på lysene, la lyset skinne kolloid. Tegn prøven inn i pipetten.
· ved hjelp av automatisk pipettering.
· i 10-200 mu 1 flytende bevegelsespunkt kan brukes i de fleste punktene på prøven. For svært små prøvehull (mindre enn 10μ1), er det lange pipettehodet som brukes til sekvensering av lim mer praktisk.

· pipettering akkurat nedsenket i prøven, inhalerer sakte bevegelig væske. Prøven kan virke klissete av glyserin, og rask pumping kan trekke luftbobler inn i pipettehodet.

· prøver etter inhalering av pipettehodet, vil bevege væskehodet forsiktig på kanten av røret eller tørkepapir suge væskehodet utenfor dråpene. Vær forsiktig så du ikke suger prøven.

Plasser prøven i prøvehullet

· pipettering enhet for å holde et lite trykk, gjør prøvene litt flytte overflow væske hodet.
· pipetteringshodet satt inn i bufferen, litt høyere enn punkthullene, opprettholder positivt trykk. Spissen av pipetten kan settes inn i et lite hull.
· sakte og jevnt prøvene ut. Pipettespissen plasseres over punktprøvehullet, og prøven vil synke ned i hullet. La prøven synke for å fylle prøvehullet i stedet for å skyve inn.
· Når den siste dråpen av prøven med væskehode, vil væsken bevege seg til det andre benet, sakte heve væsken, bevege seg ut av bufferen

Hvordan ta vertikal limprøvetaking?

· vertikale limpunktprøvehull dannet mellom to glassbiter. I svært tynt lim kan pipettehodet ikke engang settes inn mellom to glassplater. Pass på glyserin! Sett pipettehodet over prøvehullet og prøven vil synke ned i hullet.
· punkt prøve før, sørg for å sette vertikale punktet av polypropylen acyl gel prøve hullet skylles rent. Vask bort det upolymeriserte akrylamidet og vannet som kan dukke opp i bunnen av prøvehullet. Vannet kan gjøre prøvehullet betydelig mindre. Bruk en 25 ml eller 50 ml sprøyte og en 18-gauge nål. Hell i elektroforesebufferen og skyll forsiktig prøvehullet.
· det kan være vanskelig å se prøvehullet, men samtidig er resten enkelt. Hvis det er overflødige hull, kan prøvebufferen testes med bromfenolblått.